LibreOffice/6.4.3.2$Linux_X86_64 LibreOffice_project/747b5d0ebf89f41c860ec2a39efd7cb15b54f2d8 0 0 14099 9999 true $(brandbaseurl)/share/palette%3B$(userpath)/config/standard.sob 0 $(brandbaseurl)/share/palette%3B$(userpath)/config/standard.soc $(brandbaseurl)/share/palette%3B$(userpath)/config/standard.sod 1270 true true false true false $(brandbaseurl)/share/palette%3B$(userpath)/config/standard.sog $(brandbaseurl)/share/palette%3B$(userpath)/config/standard.soh false false true true false false true false false false $(brandbaseurl)/share/palette%3B$(userpath)/config/standard.soe false 7 4 false 0 low-resolution false true false 1 1 true 189 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | Evaluación del riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos en la lombriz de tierra Eisenia Fetida (Savigny, 1826) r EsumEn Se evaluó el riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos sobre la lombriz de tierra Eisenia fetida (Savigny, 1826). El parámetro de toxicidad letal evaluado fue la mortalidad, y los efectos subletales fueron seis: movilidad, oscurecimiento, adelgazamiento, estrangulación, fraccionamiento y peso corporal a los 7 y 14 días de exposición. Los organismos fueron expuestos a cinco concentraciones de gasolinas ecológicas de 90 octanos expresadas en base al xileno: 49,5 ug·kg -1 , 148,5 ug·kg -1 , 346,5 ug·kg -1 , 841,5 ug·kg -1 y 2079 ug·kg -1 . Las gasolinas ecológicas de 90 octanos (Petroperú y Repsol) en el suelo no presentaron efectos de toxicidad letal (concentración letal media, CL 50 ) en E. fetida. Los efectos subletales fueron inmovilidad, oscurecimiento y adelgazamiento. Se consideró como criterio de comparación el Estándar de Calidad Ambiental para suelos (ECA) para el Perú expresado en xileno (11 mg·kg -1 ). En base a este ECA, los parámetros más sensibles para la gasolina-Petroperú que ocasionaron riesgo en la lombriz de tierra fueron inmovilidad, oscurecimiento y adelgazamiento en relación a la Concentración en la que no se observa efecto (NOEC). Para la gasolina – Repsol, los mismos parámetros mostraron riesgo en función al NOEC; sin embargo, el peso húmedo presentó un riesgo significativo en la lombriz al igual en base a la concentración efectiva media (CE 50 ). La gasolina-Repsol presentó una mayor toxicidad para la lombriz de tierra que la gasolina–Petroperú, y el riesgo ambiental fue mayor para las respuestas subletales. Palabras clave: bioensayos, CE 50 , CL 50 , ecotoxicología, Eisenia fetida, gasolina, NOEC, toxicidad letal, toxicidad subletal a bstraCt The terrestrial environmental risk of two ecological 90 octane gasoline was evaluated on the earthworm Eisenia fetida (Savigny, 1826). The lethal toxicity parameter evaluated was mortality, and the sublethal effects were six: mobility, darkening, thinning, strangulation, fractionation, and body weight at 7 and 14 days of exposure. The organisms were exposed to five concentrations of ecological gasoline of 90 octane expressed on the basis of xylene: 49.5 ug·kg -1 , 148.5 ug·kg -1 , 346.5 ug·kg -1 , 841.5 ug·kg -1 and 2079 ug·kg -1 . The ecological 90 octane gasoline (Petro Peru and Repsol) in the soil did not show lethal toxicity effects (medium lethal concentration, LC 50 ) in E. fetida. The sublethal effects were immobility, darkening, and thinning. The Environmental Quality Standard for soils (ECA) for Peru expressed in xylene (11 mg·kg -1 ) was considered as a comparison criterion. Susana Isabel Avalos-Ruiz 1 José Iannacone 1,2,3 1 Laboratorio de Ingeniería Ambiental. Carrera de Ingeniería Ambiental. Universidad Científica del Sur (UCSUR), Lima, Perú. 2 Grupo de Investigación en Sostenibilidad Ambiental (GISA), Escuela Universitaria de Posgrado (EUPG), Laboratorio de Ecología y Biodiversidad Animal (LEBA). Facultad de Ciencias Naturales y Matemática (FCCNM). Universidad Nacional Federico Villarreal (UNFV), Lima, Perú. 3 Laboratorio de Parasitología. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Ricardo Palma. Lima, Perú. Autor para correspondencia E-mail: jiannaconeo@unfv. edu.pe Evaluation of the terrestrial environmental risk of two ecological 90 octane gasolines in the earthworm Eisenia Fetida (Savigny, 1826) Recibido: mayo 05 de 2020 | Revisado: junio 12 de 2020 | Aceptado: julio 11 de 2020 https://doi.org/10.24265/campus.2020.v25n30.01 | Campus | V. XX V | N. 30 | PP. 189-208 | julio-diciembre | 2020 | © Los autores. Este artículo es publicado por la Revista Campus de la Facultad de Ingeniería y Arquitectura de la Universidad de San Martín de Porres. Este artículo se distribuye en los términos de la Licencia Creative Commons Atribución No-comercial – Compartir-Igual 4.0 Internacional (https://creativecommons.org/licenses/ CC-BY), que permite el uso no comercial, distribución y reproducción en cualquier medio siempre que la obra original sea debidamente citada. Para uso comercial contactar a: revistacampus@usmp.pe. 190 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | Based on this ECA, the most sensitive parameters for gasoline-Petroperu that caused risk in the earthworm were immobility, darkening and thinning in relation to the Concentration in which no effect is observed (NOEC). For gasoline-Repsol, the same parameters showed risk based on NOEC; however, the wet weight presented a significant risk in the earthworm as well as based on the mean effective concentration (EC 50 ). Gasoline-Repsol presented a higher toxicity for the earthworm than gasoline-Petroperu, and the environmental risk was greater for the sublethal responses. Key words: CE 50 , CL 50 , ecotoxicology, Eisenia fetida, gasoline, LOC, lethal toxicity, NOEC, sublethal toxicity Introducción La industria de hidrocarburos es una fuente indispensable en el marco productivo del Perú (Bravo, 2007). Dentro de la gama de los hidrocarburos, las gasolinas son las más comerciales debido al incremento y demanda del parque automotor y según sea el aditivo agregado generan el octanaje de la gasolina (Murrugarra, 2009). La gasolina de 90 octanos o comúnmente llamada gasolina ecológica (Repsol, 2007) está constituida por una mezcla de hidrocarburos saturados, olefinas, naftenos y aromáticos (Petroperú, 2013; Pinedo et al., 2013; Abdollahinejad et al., 2020). Los derrames incontrolados de combustibles en estaciones de servicio y en plantas industriales han generado un deterioro significativo de los ecosistemas naturales tanto contaminación del suelo como de las aguas subterráneas (Flores & Bitteri, 2000). El derrame de gasolina es considerado como uno de los accidentes ambientales con mayor dificultad para su mitigación o remediación, pero a la par estos derrames se están presentando con mayor frecuencia debido al mal estado de las vías de transporte y de la disposición final (Flores et al., 2004; Lemos et al., 2020). Desde hace algunos años atrás, el uso de organismos biológicos llamados bioindicadores en ensayos de ecotoxicidad está ampliamente documentado, por este motivo, en años recientes se han usado otras respuestas biológicas “biomarcadores” (Iannacone & Alvariño, 2004, 2005; Iannacone et al., 2006; Iannacone et al., 2009; Khan et al., 2018; Escobar-Chávez et al., 2019; Bamgbose & Anderson, 2020; Bautista-Medina & Iannacone, 2020; Lemos et al., 2020). Para tal efecto, los ensayos ecotoxicológicos pueden ser empleados en diversos niveles, desde el sub-individual (evaluación de efectos moleculares y bioquímicos) hasta el nivel poblacional, comunidad y ecosistema (Kammenga et al., 2000; Iannacone & Alvariño, 2005; da Silva Júnior et al., 2018; Khan et al., 2018; Escobar-Chávez et al., 2019; Bamgbose & Anderson, 2020; Bautista-Medina & Iannacone, 2020; Lemus et al., 2020). La lombriz de tierra o la lombriz roja californiana Eisenia fetida (Savigny, 1826) (Annelida) es considerada a nivel mundial como una de las más representantes dentro la macrofauna del suelo y dentro de todas las lombrices de tierra en particular (OECD, 1984; da Silva Júnior et al., 2018). Eisenia fetida, es de gran importancia gracias a que cumple un rol ecológico primordial Susana Isabel Avalos- Ruiz - José Iannacone 191 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | (Sanchez-Hernandez, 2006; Lemos et al., 2020), como por ejemplo causan modificaciones físicas en el suelo así como al mismo tiempo incrementa las posibilidades de desarrollo de otros animales y plantas generando un equilibrio en el ecosistema (Brown et al., 2004; Abdollahinejad et al., 2020). Adicionalmente las lombrices de tierra son capaces de acumular varios contaminantes orgánicos e inorgánicos presentes en el suelo (Morrison et al., 2000; Boyd et al., 2001; Peijnenburg, 2002; Cuevas et al., 2008; Abdollahinejad et al., 2020). La lombriz de tierra ha sido propuesta, extensivamente, en estudios ecotoxicológicos (Scott-Fordsmand & Weeks, 2000; da Silva Júnior et al., 2018; Khan et al., 2018; Bamgbose & Anderson, 2020). La presente investigación evidencia que la lombriz de tierra es un modelo biológico estándar para identificar impactos ecosistémicos potenciales por derrame de hidrocarburos al suelo, lo que será de mucha utilidad en el Perú (Abdollahinejad et al., 2020), debido a que actualmente no se cuenta con un registro detallado sobre el efecto ecotoxicológico que generan los derivados de hidrocarburos-gasolinas de mayor circulación, distribución y venta en el Perú (da Silva Júnior et al., 2018; Khan et al., 2018). Adicionalmente, esta investigación sirve de modelo para mejorar la normativa para un mejor cuidado del medio ambiente en el sector público, mientras que en el sector privado ayudará a implementar protocolos de monitoreo ambiental. El objetivo de la presente investigación fue determinar el riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos en la lombriz de tierra. Materiales y Métodos Fundamento del protocolo Se seleccionó el protocolo del ensayo de toxicidad letal estático (Cuevas et al., 2008) y el efecto tóxico subletal en lombriz de tierra E. fetida a nivel laboratorio y descrito en la guía 207 de la OECD para evaluación de sustancias (OECD, 1984). Obtención y selección del material biológico Se escogió a E. fetida por ser una especie indicadora de calidad ambiental del suelo (Cuevas et al., 2008). Se seleccionaron individuos de similar tamaño y con presencia del anillo clitelar desarrollado y visible, el cual es indicativo de su capacidad reproductiva (OECD, 1984). Las lombrices adultas se seleccionaron de un mismo cultivo (con el fin de evitar variaciones en los resultados), con un peso corporal en el rango 100 - 300 mg (promedio=192; n=280). Preparación de sustrato artificial La preparación del suelo artificial consistió en la mezcla de 10% de musgo de turba (materia orgánica), 20% de arcilla, y 70% de arena industrial (partículas entre 50-200 μm, previamente tamizada. Del mismo modo, se le agregó la cantidad de agua necesaria para obtener una humedad aproximada del 35%. La preparación se mezcló hasta conseguir homogeneidad (OECD, 1984). En la Tabla 1, se detallan los valores más representativos de caracterización de la muestra de suelo usados en los bioensayos con E. fetida. Evaluación del riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos en la lombriz de tierra Eisenia Fetida (Savigny, 1826) 192 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | Tabla 1 Análisis de caracterización del suelo usado en los bioensayos con Eisenia fetida. AF = Arena Franca Materia Orgánica (%) 5,7 Método de Walkley & Black pH (1:1) 6,7 Medida del potenciómetro de la suspensión suelo CE (dS·m -1 ) 2,91 Medida en extracto acuoso relación- suelo: agua CaCO3 (%) 1,1 Método Gaso-volumétrico CIC (meq·100g -1 ) 9,6 Método de saturación con acetato de amonio Clase Textual AF Método del hidrómetro En la Tabla 2, se muestra que predominó la fracción arena por el método del hidrómetro; por lo tanto, la clase textual de suelos predominante fue de Arena Franca (AF). Tabla 2 Análisis de granulometría del suelo usado en los bioensayos con Eisenia fetida % Arena muy gruesa (2,00 -1,00 mm) 0,46 % Arena gruesa (1,00 – 0,50 mm) 5,16 % Arena media (0,50 – 0,25 mm) 26,8 % Arena fina (0,25 – 0,10 mm) 39,92 % Arena muy fina (0,10 – 0,05 mm) 11,04 % Limo 8,98 % Arcilla 7,64 Aclimatación de lombrices Para llevar a cabo la aclimatación de las lombrices se realizaron dos actividades: (1) previo a la aclimatación, se les dieron todas las condiciones necesarias, su alimentación consistió de tomates “cherry” descompuestos del huerto de la Universidad Científica del Sur (UCSUR), Lima, Perú; (2) posteriormente, las lombrices seleccionadas fueron aclimatadas en suelos de similares condiciones a lo largo de una semana y no recibiendo alimento durante el bioensayo (OECD, 1984). Los ensayos de aclimatación fueron considerados validos cuando la mortalidad de E. fetida no sobrepasó el 10% (Iannacone & Alvariño, 2004). La cantidad de agua de riego suministrada cada dos a tres días durante ensayo fue de 50 a 75 mL, la humedad en suelo se mantuvo en el rango óptimo establecido de 40-80%, considerando la respuesta aceptable de los bioensayos (Alonzo & Chicas, 2013). Sustancias químicas Se utilizó gasolinas ecológicas de 90 octanos de dos proveedores: Repsol (pH aproximado de 6 y densidad aproximada de 0,71 – 0,73) y Petroperú (pH aproximado de 5,5 y densidad aproximada de 0,75). Para ambos casos se asumió una densidad de 0,75 g·cm -3 y se utilizó el concentrado equivalente a un galón de gasolina a 15°C. Para identificar y seleccionar el valor de las concentraciones utilizadas en las series experimentales, se consideraron los valores registrados en la literatura científica (Iannacone & Alayo 2002; Iannacone & Alvariño 2004), Susana Isabel Avalos- Ruiz - José Iannacone 193 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | tomando en cuenta que la gasolina tiene la siguiente composición: 4-8% alcanos; 2-5% alquenos; 25-40% isoalcanos; 3-7% cicloalcanos; l-4% ciclcloalquenos; y 20-50% aromáticos totales (ATSDR, 1995). Las concentraciones de gasolina de 90 octanos se consideraron en función al compuesto predominante en los aromáticos totales que fue el xileno. Para determinar las concentraciones de las dos gasolinas de 90 octanos se tomó en cuenta el 6,6% de pureza del xileno. Se determinó este elemento debido a que es el compuesto predominante en la composición de los aromáticos totales, y estos a su vez predominan en la composición de la gasolina. Así mismo es el elemento de mayor persistencia en suelo (ATSDR, 1995; Pinedo, 2014; NTP, 2017). Las concentraciones en base al xileno fueron: 49,5 ug·kg -1 , 148,5 ug·kg -1 , 346,5 ug·kg -1 , 841,5 ug·kg -1 y 2079 ug·kg -1 . Los tratamientos fueron: cinco concentraciones y dos controles (un control de agua y un control mezcla de alcohol y agua). Adicionalmente, se realizaron cuatro repeticiones por cada tratamiento (Iannacone & Alayo, 2002; Cuevas et al., 2008). Bioensayos Para realizar el montaje de los bioen- sayos se seleccionaron contenedores de plástico. Cada contenedor contuvo 1 kg de suelo artificial con cada tratamiento y 10 lombrices en cada uno, las cuales fue- ron previamente climatizados. Se com- probó mediante la repuesta a estímulos de tacto y escape de la luz que las lom- brices estaban saludables antes de iniciar el experimento (Gómez, 2014; Cuevas et al., 2008ab; Palafox et al., 2012). El pun- to final considerado como respuesta letal fue la mortalidad, evaluada a través de CL 50 , y los puntos finales de respuesta su- bletal fueron siete: inmovilidad, oscureci- miento, adelgazamiento, estrangulación, fragmentación, peso seco y peso húmedo evaluado a través de CE 50 (Concentra- ción efectiva media), LOEC (Concen- tración más baja de efectos observables) y NOEC (Concentración de efectos no observables) para las gasolinas de Repsol y Petroperú a 7 y 14 días de exposición (OECD, 1984; Schaefer et al., 2005). Durante la aclimatación y el desarrollo del bioensayo, se controlaron la temperatura y humedad relativa, los cuales se midieron con un termohidrómetro (Coolbox®). El comportamiento de la temperatura se mantuvo poco fluctuante, esto debido a que el bioensayo se realizó en el invernadero de la UCSUR, y se encontró que la temperatura más alta fue de 24,6°C, mientras que la más baja fue de 19°C (promedio=21,29±1,54°C) y un rango de 19-24,6°C. Con respecto a la humedad relativa, presentó valores estables con un promedio de 73%±0,08; dentro de un rango de 60-88% cada semana aproximadamente. Evaluación de Riesgo Ambiental (ERA) Para determinar el riesgo de la gasolina de 90 octanos, se eligieron los resultados de los ensayos de toxicidad más sensibles, o sea el valor menor de NOEC y CE (L) 50 a partir de los datos obtenidos de los efectos letales y subletales en los bioensayos con E. fetida. Para establecer los valores de las concentraciones que no causan efectos sobre los organismos, se determinó el PNEC (concentración Evaluación del riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos en la lombriz de tierra Eisenia Fetida (Savigny, 1826) 194 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | por debajo de la cual se estima que no se producirán efectos adversos sobre los organismos) y se calculó en base a los siguientes valores por separado. Los valores de NOEC se dividieron entre un factor de seguridad de 100 y los valores de la concentración efectiva media CE (L) 50 se dividieron entre 1000 (IHCP, 2003). Para tal efecto, se determinó la exposición al contaminante, tomando el valor del compuesto xileno indicado en el Estándar de Calidad Ambiental de Suelo de la norma peruana (Decreto Supremo N° 002-2013-MINAM). Finalmente se determinó el riesgo a través de la evaluación del cociente de riesgo (CR) dividiendo la concentración de exposición (ECA suelo) entre el PNEC estimado (Delgado-Blas & Uc-Peraza, 2015). Es preciso indicar que un cociente de riesgo inferior a un 1 representa generalmente un riesgo aceptable, mientras que un cociente superior a un nivel crítico comparativo (LOC) equivalente a 1 se considera preocupante por tratarse de una exposición muy elevada que puede representar un riesgo (Planes & Fuchs, 2015). Análisis estadístico A través de un análisis de varianza (ANDEVA) en bloques completamente aleatorios se evaluó la eficacia de las concentraciones de las gasolinas entre las repeticiones y finalmente entre los tiempos) de exposición (7 y 14 días). Como se presentaron diferencias significativas entre las réplicas, se realizó una prueba de significancia (Diferencia Verdaderamente Significativa-DVS) mediante una prueba de Tukey (Iannacone & Alayo, 2002). Por su parte, las CE (L) s50, se calcularon usando el programa computarizado Probit versión 1,5 de la USEPA. Para probar diferencias entre las medias de las lecturas a los 7 y 14 días de exposición se realizó una prueba t-student para muestras relacionadas y simultáneamente se corrigieron con la fórmula de Schneider-Orelli’s, la misma que permite ajustar los valores a cero cuando existe mortalidad en control pero no supera el 10%. Asimismo los datos obtenidos se analizaron con el paquete estadístico SPSS 20,0 para establecer si existían o no diferencias significativas. Se consideró en todos los casos un valor de p ≤ 0,05 como significativo (EPA, 1998). Resultados Gasolina de 90 octanos–Petroperú expresada en base al xileno (ug·kg -1 ) La Tabla 3 muestra los valores en porcentaje de los parámetros evaluados: mortalidad, inmovilidad,oscurecimien- to, adelgazamiento, estrangulación, frac- cionamiento y peso) sobre la lombriz de tierra E. fetida bajo el efecto de cinco concentraciones crecientes de gasolina de 90 octanos-Petroperú y expresadas en ug de xileno en kg -1 de suelo. No se observó efecto letal en E. fetida en relación a la gasolina de 90 octanos– Petroperú. Se determinó que el NOEC fue la concentración más alta utilizada durante el bioensayo. Se observó un incremento en el porcentaje de mortalidad a los 14 días de exposición (t=4,50; p=0,004). En el parámetro inmovilidad, se observaron diferencias estadísticamente significativas en los bioensayos a los 7 y 14 días de exposición. Se determinó que el LOEC fue de 49,5 ug·kg -1 . Se notó una disminución en el porcentaje de inmovilidad entre ambos días de Susana Isabel Avalos- Ruiz - José Iannacone 195 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | exposición (t=2,93; p=0,02). En relación al oscurecimiento se determinó que el LOEC fue de 49,5 ug·kg -1 . Ambos días de exposición no presentaron diferencias en el patrón de efecto (t=2,20; p=0,07). Los valores de CE 50 a los 7 y 14 días para el parámetro adelgazamiento decrecieron para las concentraciones ensayadas. Se observaron diferencias estadísticamente significativas en los bioensayos segúnel tiempo de exposición (t=2,59; p=0,04). Para el parámetro estrangulación se observó un incremento en el porcentaje del parámetro estrangulación con el tiempo de exposición (t=3,36; p=0,01). No se observaron valores de CE 50 en los bioensayos sobre E. fetida en relación al fraccionamiento. Se determinó que el NOEC fue la concentración más alta utilizada durante el bioensayo. No se apreció un incremento en el porcentaje de fraccionamiento (t=1,44; p=0,20). El promedio de peso corporal empleado en el bioensayo con gasolina de 90 octanos- Petroperú no varió en relación a las concentraciones evaluadas. Se observó un incremento en el porcentaje de peso húmedo con el tiempo de exposición (t=7,96; p=0,00). Los resultados muestran que la lombriz de tierra E. fetida presenta una alta sensibilidad en relación a los parámetros de movilidad, oscurecimiento y adelgazamiento. Por otro lado, no se observaron efectos sobre la lombriz de tierra en los parámetros de mortalidad, estrangulación, fraccionamiento y peso corporal. La ERA de la gasolina de 90 octanos- Petroperú en base al NOEC, mostró que todos parámetros evaluados fueron sensibles y por lo tanto ayudaron a determinaron el riesgo, pues presentaron valores mayores a 1 (Tabla 4). La ERA de la gasolina de 90 octanos–Petroperú evaluada en base a la toxicidad de la concentración efectiva (CE 50 ), mostró que tres de los parámetros evaluados a los 7 y 14 días presentaron un riesgo para la lombriz de tierra E. fetida. Así, la secuencia relativa de mayor a menor en relación a los cocientes de riesgo de la gasolina de 90 octanos-Petroperú fue igual para ambos días de exposición: oscurecimiento > inmovilidad > adelgazamiento. Evaluación del riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos en la lombriz de tierra Eisenia Fetida (Savigny, 1826) 196 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | Tabla 3 Efectos letales y subletales de la gasolina de 90 octanos–Petroperú en seis parámetros porcentuales y en el peso corporal (mg) evaluados en Eisenia fetida. ND. Valor No determinado. d=día. En una misma fila, valores con letras minúsculas diferentes (a, b, c, d) son significativamente diferentes en la variación de los parámetros evaluados en los tratamientos (prueba de Tukey p< 0,05). IA: Ingrediente Activo (Xileno 6,6%). Los porcentajes de los parámetros son los valores promedios para las cuatro réplicas. 10 ND. Valor No determinado. d=día. En una misma fila, valores con letras minúsculas diferentes (a, b, c, d) son significativamente diferentes en la variación de los parámetros evaluados en los tratamientos (prueba de Tukey p< 0,05). IA: Ingrediente Activo (Xileno 6,6%). Los porcentajes de los parámetros son los valores promedios para las cuatro réplicas. Concentración (ug IA•Kg-1) 7 d 14 d 7 d 14 d 7 d 14 d 7 d 14 d 7 d 14 d 7 d 14 d Peso Húmedo 7d Peso Húmedo 14d Peso Seco 14d Control Agua 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0 0a 0 168,75a 158,46a 28,21a Control Agua + Alcohol 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0 0a 0 185,5a 161,25a 27a 49,5 2,5ab 2,56a 22,86b 8,57ab 34,29b 37,14b 25,71b 7,14a 2,5a 0 0a 0 172,31a 143,16a 29,21a 148,5 2,5ab 5,13a 42,86bc 28,57bc 48,57bcd 48,57bc 37,14bc 21,43a 5a 0 0a 0 182,82a 162,16a 27,84a 346,5 10b 12,82a 57,14cd 42,86cd 37,14 bc 51,43bc 28,57b 28,57ab 5a 0 2,5a 0 165,28a 151,76a 27,06a 841,5 5ab 5,13a 60cd 45,71cd 57,14cd 60cd 57,14cd 53,57b 2,5a 0 0a 0 177,37a 156,22a 27,57a 2079 5ab 7,69a 74,29d 57,14 d 68,57d 74,29d 62,86 d 57,14b 5a 0 5a 0 184,47a 156,94a 27,22a NOEC (ug IA•Kg-1) 2079 2079 < 49,5 < 49,5 < 49,5 < 49,5 < 49,5 < 49,5 2079 - 2079 - 2079 2079 2079 LOEC (ug IA•Kg-1) >2079 >2079 49,5 49,5 49,5 49,5 49,5 49,5 >2079 - >2079 - >2079 >2079 >2079 Levene 12,83 1,84 2,81 0,94 0,84 1,17 2,29 0,64 5,61 - 19,71 - 0,97 1,61 0,41 Sig 0 0,14 0,036 0,49 0,55 0,36 0,074 0,69 0,001 - 0 - 0,45 0,14 0,87 F 2,93 2 48,294 19,96 36,81 44,46 27,63 14,08 0,65 - 1,75 - 2,16 1,75 0,44 Sig 0,031 0,11 0 0 0 0 0 0 0,69 - 0,16 - 0,047 0,11 0,85 CE(L)50 (ug IA•Kg-1) ND ND 299,9 974,23 277,84 213,99 603,11 1110 ND ND ND ND ND ND ND Inmovilidad % Estrangulación % Oscurecimiento % Fraccionamiento % Peso Corporal (mg) Mortalidad % Adelgazamiento % Susana Isabel Avalos- Ruiz - José Iannacone 197 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | Tabla 4 Evaluación del riesgo ambiental terrestre de la gasolina ecológica de 90 octanos–Petroperú en base al xileno sobre Eisenia fetida. 11 Tabla 4 Evaluación del riesgo ambiental terrestre de la gasolina ecológica de 90 octanos–Petroperú en base al xileno sobre Eisenia fetida. Toxicidad=NOEC=Concentración más alta en la que no se observa efecto. Exposición=ECAsuelo=Estándar de Calidad Ambiental de Suelo DS N° 002-2013-MINAM-Perú para el xileno. Factor de seguridad=100 para NOEC y 1000 para CE 50 . PNEC= Concentración pronosticada sin efecto= NOEC/Factor de seguridad. CR=Cociente de Riesgo= Exposición/PNEC. LOC= Nivel crítico. Letal Mortalidad 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Inmovilidad 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Oscurecimiento 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Adelgazamiento 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Estrangulación 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Fraccionamiento 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Peso humedo 7° día 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Peso húmedo 14° día 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Peso seco 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Especie Efecto Tóxico Parámetros Toxicidad CE(L)50 Factor PNEC Exposición (ECA suelo) (ug•Kg-1) CR LOC RIESGO NOEC Inmovilidad 7° día 299,9 1000 0,30 11000 36678,89 1.00 SI Oscurecimiento 7° día 277,84 1000 0,28 11000 39591.13 1.00 SI Adelgazamiento 7° día 603,11 1000 0,60 11000 18238,80 1.00 SI Inmovilidad 14° día 974,23 1000 0,97 11000 11290,97 1.00 SI Oscurecimiento 14° día 213,99 1000 0,21 11000 51404,27 1.00 SI Adelgazamiento 14° día 1110 1000 1,11 11000 9909,91 1.00 SI Especie Efecto Tóxico Parámetros Toxicidad NOEC Factor PNEC NOEC Exposición (ECA suelo) (ug•Kg -1 ) CR LOC RIESGO NOEC Eisenia fetida Eisenia fetida Subletal Subletal Toxicidad=NOEC=Concentración más alta en la que no se observa efecto. Exposición=ECAsuelo=Estándar de Calidad Ambiental de Suelo DS N° 002-2013-MINAM-Perú para el xileno. Factor de seguridad=100 para NOEC y 1000 para CE 50 . PNEC= Concentración pronosticada sin efecto= NOEC/Factor de seguridad. CR=Cociente de Riesgo= Exposición/PNEC. LOC= Nivel crítico. Gasolina de 90 Octanos – Repsol, expresada en base al xileno (ug·kg -1 ) La Tabla 5 muestra los efectos de la mortalidad, inmovilidad, oscurecimiento, adelgazamiento, estrangulación, fraccionamiento y peso sobre E. fetida por efecto de gasolina de 90 octanos-Repsol y expresadas en ug de xileno·IA·kg -1 . No se observó variciones en la mortalidad a los 7 y 14 días de exposición (t=2,20; p=0,07). Se determinó que el NOEC fue la concentración más alta utilizada durante el bioensayo. Para la inmovilidad se registraron diferencias en los valores de CE 50 entre los 7 y 14 días (t=1,95; p=0,09). No se notó diferencias en el oscurecimiento según el tiempo de exposición (t=1,55; p=0,17). Los valores de CE 50 a los 7 y 14 días para el parámetro adelgazamiento decrecieron para las concentraciones ensayadas. Para ambos días de exposición presentaron un patrón de efecto diferente (t=6,82; p<0,05). Para el parámetro estrangulación, no se observó cambio con el tiempo de exposición (t=2,29; p=0,06). No se vieron diferencias para la CE 50 de E. fetida en relación al fraccionamiento entre los 7 y Evaluación del riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos en la lombriz de tierra Eisenia Fetida (Savigny, 1826) 198 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | 14 días de exposición (t=1,33; p=0,23). El peso corporal empleado en el bioensayo con gasolina de 90 octanos-Repsol varió en relación a las concentraciones. Se observó un aumento en el peso húmedo con el tiempo de exposición (t=17,14; p=0,00). Se vio sensibilidad en relación a movilidad, oscurecimiento y adelgazamiento. Al comparar entre ambas gasolinas de 90 octanos ecológicas, se obtuvo que la mayor toxicidad de la gasolina- Petroperú en la inmovilidad (CE 50 = 974,23 ug·kg -1 ) y en la gasolina-Repsol en el adelgazamiento (CE 50 = 418,41 ug·kg -1 ). La gasolina de Repsol en general es más tóxica que la de Petroperú. La ERA en base al NOEC, mostró que los parámetros evaluados determinaron riesgo al presentar valores superiores al LOC equivalente a 1. Hay riesgo para la gasolina de 90 octanos-Repsol en la inmovilidad, oscurecimiento, adelgazamiento y peso húmedo de E. fetida. (Tabla 6). Tabla 5 Efectos letales y subletales de la gasolina de 90 octanos–Repsol en seis parámetros porcentuales y en el peso corporal (mg) evaluados en Eisenia fetida. 14 ND. Valor No determinado. d=día. En una misma fila, valores con letras minúsculas diferentes (a, b, c, d) son significativamente diferentes en la variación de los parámetros evaluados en los tratamientos (prueba de tukey p<0,05). IA: Ingrediente Activo (Xileno 6,6%). Los porcentajes de los parámetros son los valores promedios para las cuatro réplicas. Concentración (ug IA•Kg-1) 7 d 14 d 7 d 14 d 7 d 14 d 7 d 14 d 7 d 14 d 7 d 14 d Peso Húmedo 7d Peso Húmedo 14d Peso Seco 14d Control Agua 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0 203,50a 157,75a 25,5a Control Agua + Alcohol 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0 215,75a 174,25ab 25,5a 49.5 2,5a 2,5a 42,5b 27,03b 37,14b 36,36b 26,47b 56,67b 0a 0a 0a 0 218,97a 184,87b 23,33a 148.5 2,5a 7,5a 52,5bc 32,43bc 51,43bc 45,45bc 44,12bc 63,33b 5a 0a 0a 0 219,74a 183,78ab 25,68a 346.5 7,5a 10a 60cd 45,95bc 51,43bc 48,48bc 50cd 63,33b 2,5a 0a 0a 0 225,68a 174,72ab 23,89a 841.5 0a 10a 62,5cd 48,65c 60bc 60,61c 64,71d 80b 10a 0a 2,5a 0 218,75a 184,17b 23,33a 2079 0a 12,5a 70d 51,35 c 65,71c 63,64c 52,94cd 83,33b 12,5a 2,5a 7,5a 0 227,25a 185,14b 23,94a NOEC (ug IA•Kg-1) 2079 2079 < 49,5 < 49,5 < 49,5 < 49,5 < 49,5 < 49,5 2079 2079 2079 - 2079 346,5 2079 LOEC (ug IA•Kg-1) > 2079 > 2079 49,5 49,5 49,5 49,5 49,5 49,5 > 2079 > 2079 > 2079 - > 2079 >841,5 > 2079 Levene 8,36 8,77 2,57 0,73 1,72 0,77 2,5 1,67 31,73 9 10,64 - 3,79 1,42 0,6 Sig 0 0 0,05 0,63 0,17 0,6 0,06 0,18 0 0 0 - 0,001 0,21 0,73 F 1,53 1,39 70,49 24,23 28,38 32,5 47,5 25,69 1,78 1 1,93 - 1,65 2,69 0,63 Sig 0,22 0,27 0 0 0 0 0 0 0,15 0,45 0,12 - 0,13 0,015 0,7 CE(L)50 (ug IA•Kg-1) ND ND 117,59 1194 207,04 300,21 418,41 43,67 ND ND ND ND ND ND ND Mortalidad % Inmovilidad % Oscurecimiento % Adelgazamiento % Estrangulación % Fraccionamiento % Peso Corporal (mg) ND. Valor No determinado. d=día. En una misma fila, valores con letras minúsculas diferentes (a, b, c, d) son significativamente diferentes en la variación de los parámetros evaluados en los tratamientos (prueba de tukey p<0,05). IA: Ingrediente Activo (Xileno 6,6%). Los porcentajes de los parámetros son los valores promedios para las cuatro réplicas. Susana Isabel Avalos- Ruiz - José Iannacone 199 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | Tabla 6 Evaluación del riesgo ambiental terrestre de la gasolina ecológica de 90 octanos–Repsol en base al xileno sobre Eisenia fetida. Toxicidad= NOEC=Concentración más alta en la que no se observa efecto. Exposición=ECAsuelo=Estándar de Calidad Ambiental de Suelo DS N° 002-2013-MINAM-Perú para el xileno. Factor de seguridad= 100 o 1000 (Este valor es inversamente proporcional a la cantidad y calidad de los datos de toxicidad); (100) para NOEC y (1000) para CE 50 . PNEC=Concentración pronosticada sin efecto=NOEC/Factor de seguridad. CR=Cociente de Riesgo= Exposición/PNEC. LOC= Nivel crítico comparativo. Discusión De los bioensayos realizados con la gasolina en base al xileno, no se observaron efectos letales significativos en la mortalidad de E. fétida. Nuestros resultados son similares a Bamgbose & Anderson (2020) encontraron que los biodiesel y diesel en E. fetida fue menos tóxicos en ensayos de mortalidad que en las respuestas subletales. da Silva Júnior et al. (2018) no observaron cambios en la mortalidad en las lombrices de tierra por acción del BTEX (benceno, tolueno, etilbenceno y xileno). Abdollahinejad et al. (2020) observaron tasas de sobrevivencia razonables de la lombriz de tierra por acción de suelo contaminados por derivados de petróleo. En contraste no concuerda con lo presentado por Gómez (2014), quien evaluó la mortalidad de este invertebrado en suelos contaminados por pozos petroleros y de refinerías de petróleo, encontrando efecto en la toxicidad por letalidad. Otros autores como Kobeticová et al. (2008) registraron mortalidad por los HAP (Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos) en E. fetida después de cuatro semanas de Evaluación del riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos en la lombriz de tierra Eisenia Fetida (Savigny, 1826) 15 Tabla 6 Evaluación del riesgo ambiental terrestre de la gasolina ecológica de 90 octanos–Repsol en base al xileno sobre Eisenia fetida. Toxicidad= NOEC=Concentración más alta en la que no se observa efecto. Exposición=ECAsuelo=Estándar de Calidad Ambiental de Suelo DS N° 002-2013- MINAM-Perú para el xileno. Factor de seguridad= 100 o 1000 (Este valor es inversamente proporcional a la cantidad y calidad de los datos de toxicidad); (100) para NOEC y (1000) para CE 50 . PNEC=Concentración pronosticada sin efecto=NOEC/Factor de seguridad. CR=Cociente de Riesgo= Exposición/PNEC. LOC= Nivel crítico comparativo. Letal Mortalidad 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Inmovilidad 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Oscurecimiento 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Adelgazamiento 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Estrangulación 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Fraccionamiento 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Peso humedo 7 días 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Peso húmedo 14 días 346,5 100 3,47 11000 3174,60 1.00 SI Peso seco 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Especie Efecto Tóxico Parámetros Toxicidad CE(L)50 Factor PNEC Exposición (ECA suelo) (ug•Kg-1) CR LOC RIESGO NOEC Inmovilidad 7° día 117,59 1000 0,11759 11000 93545,37 1.00 SI Oscurecimiento 7° día 207,04 1000 0,20704 11000 53129,83 1.00 SI Adelgazamiento 7° día 418,41 1000 0,41841 11000 26290,00 1.00 SI Inmovilidad 14° día 1194 1000 1194.00 11000 9212,73 1.00 SI Oscurecimiento 14° día 300,21 1000 0,30021 11000 36641,02 1.00 SI Adelgazamiento 14° día 43,67 1000 0,04367 11000 251889,17 1.00 SI RIESGO NOEC Factor PNEC NOEC Exposición (ECA suelo) (ug•Kg -1 ) CR LOC Toxicidad NOEC Especie Efecto Tóxico Parámetros Eisenia fetida Eisenia fetida Subletal Subletal 15 Tabla 6 Evaluación del riesgo ambiental terrestre de la gasolina ecológica de 90 octanos–Repsol en base al xileno sobre Eisenia fetida. Toxicidad= NOEC=Concentración más alta en la que no se observa efecto. Exposición=ECAsuelo=Estándar de Calidad Ambiental de Suelo DS N° 002-2013- MINAM-Perú para el xileno. Factor de seguridad= 100 o 1000 (Este valor es inversamente proporcional a la cantidad y calidad de los datos de toxicidad); (100) para NOEC y (1000) para CE 50 . PNEC=Concentración pronosticada sin efecto=NOEC/Factor de seguridad. CR=Cociente de Riesgo= Exposición/PNEC. LOC= Nivel crítico comparativo. Letal Mortalidad 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Inmovilidad 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Oscurecimiento 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Adelgazamiento 49,5 100 0,50 11000 22222,22 1.00 SI Estrangulación 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Fraccionamiento 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Peso humedo 7 días 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Peso húmedo 14 días 346,5 100 3,47 11000 3174,60 1.00 SI Peso seco 2079 100 20,79 11000 529,10 1.00 SI Especie Efecto Tóxico Parámetros Toxicidad CE(L)50 Factor PNEC Exposición (ECA suelo) (ug•Kg-1) CR LOC RIESGO NOEC Inmovilidad 7° día 117,59 1000 0,11759 11000 93545,37 1.00 SI Oscurecimiento 7° día 207,04 1000 0,20704 11000 53129,83 1.00 SI Adelgazamiento 7° día 418,41 1000 0,41841 11000 26290,00 1.00 SI Inmovilidad 14° día 1194 1000 1194.00 11000 9212,73 1.00 SI Oscurecimiento 14° día 300,21 1000 0,30021 11000 36641,02 1.00 SI Adelgazamiento 14° día 43,67 1000 0,04367 11000 251889,17 1.00 SI RIESGO NOEC Factor PNEC NOEC Exposición (ECA suelo) (ug•Kg -1 ) CR LOC Toxicidad NOEC Especie Efecto Tóxico Parámetros Eisenia fetida Eisenia fetida Subletal Subletal 200 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | exposición. Pasková et al. (1988) y Droge et al. (2006) observaron una alta toxicidad de los HAP en la biota del suelo. Uno de las razones por los cuales no se registraron efectos letales en E. fetida podría deberse a las características de los BTEX presentes en la gasolina, debido a que la misma al contacto con el suelo superficial actúa por volatilización, disolución o la adsorción de componentes individuales según sus propiedades físicas/químicas (ATSDR, 1995). La identificación de los efectos de la toxicidad subletal es de suma importancia, debido a que nos ayuda a determinar el estado de la lombriz de tierra, pues estos se ven reflejados en su crecimiento y reproducción a mediano plazo (Radamass et al., 2015; da Silva Júnior et al., 2018; Bamgbose & Anderson, 2020). Se observaron efectos subletales para la inmovilidad sobre E. fetida. Este se podría explicar por una reducción en la producción de la mucosidad que disminuye el desplazamiento de la lombriz (Weeks & Comber, 2005). Tang et al. (2016) encontraron que los tóxicos en el suelo ocasionan una reducción del enterramiento e inhibición en el ritmo respiratorio. De los tres parámetros más sensibles, el oscurecimiento a los 14 días de exposición resultó ser un sensible a la gasolina-Petroperú. An & Lee (2008) registraron que la exposición corporal es más tóxica que la exposición a tóxicos por ingesta en la lombriz de tierra. Roubalová et al. (2015) aseveraron que cuando se acumulan los contaminantes se pueden romper células y tejidos, por la reducción progresiva de las vellosidades intestinales y del tejido cloragógeno en las lombrices de tierra. Salanitro et al. (1997) indican que las respuestas bioquímicas como el estrés oxidativo y la genotoxicidad a los tóxicos en las lombrices de tierra todavía no han sido investigadas a profundidad. El adelgazamiento en E. fetida está ligado a la pérdida de fluidos celómicos tal como lo afirma Radamass et al. (2015) quienes compararon dos tipos de aceites de motor (fresco y usado) y encontraron toxicidad en base a la inactividad, fragmentación, hinchazón y expulsión de fluido celómico antes de la muerte. Curry (1994), indica que los contaminantes más pesados conducen a efectos negativos en la lombriz, produciendo problemas como la pérdida de peso (adelgazamiento) debido a que prefieren morir de inanición en lugar de alimentarse de suelos contaminados (Radamass et al., 2015). Bamgbose & Anderson (2020) observaron en E. fetida respuestas de morbilidad como descarga excesiva de fluídos celómicos por acción de compuestos biodiesel y diesel. Para los tres parámetros más sensibles también se observó que el valor de la concentración más baja de NOEC (<49,5 ug·kg -1 ) generó los efectos más representativos tanto para la gasolina de 90 octanos-Petroperú como para la gasolina de 90 octanos-Repsol. Los parámetros subletales reflejan efectos que no se pueden observar con las pruebas de toxicidad letal (Dominique et al., 2007; Kuppusamy et al., 2020). Dawson et al. (2007) sugieren la incorporación de pruebas subletales para las lombrices de tierra proporcionan datos sensibles y ecológicamente relevantes (Lowe & Butt, 2007). Los parámetros de estrangulación y fraccionamiento no influyeron de Susana Isabel Avalos- Ruiz - José Iannacone 201 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | manera significativa en la lombriz de tierra. Venkateswara et al. (2003), afirman que la segmentación ocurre por el agotamiento de fluido celómico. Eom et al. (2007) muestran por efectos subletales sensibilidad de E. fetida a suelos contaminados con hidrocarburos aromáticos. Venkateswara et al. (2003) adicionan que la exposición al tetraetilo de plomo (TEL) y óxido de plomo (un aditivo de la gasolina) provoca rupturas de la cutícula y la piel, extrusión de fluido celómico y segmentación. Bamgbose & Anderson (2020) encontraron en E. fetida respuestas de fragmentación anterior y posterior por exposición a compuestos biodiesel y diésel. El peso húmedo y el peso seco no ocasionaron toxicidad en el oligoqueto. Bamgbose & Anderson (2020) observaron en la lombriz de tierra disminución del peso por efecto del biodiesel y diésel. Liu et al. (2010) afirman que los contaminantes hidrofílicos pueden entran en el cuerpo de lombriz a través de la piel predominantemente, mientras que las sustancias hidrofóbicas entran a través del tracto digestivo. Lo resultados evidencian que las gasolinas ecológicas no afectan la ingestión y la asimilación de las lombrices lo cual se vio evidenciado en la ausencia de efecto en el peso de las lombrices. Radamass et al. (2015) afirman que las enzimas deshidrogenasas y nitrificadoras de los microorganismos de suelo tienden a controlar los efectos de los HTP sobre la toxicidad del suelo. Spurgeon et al. (2003) y Labud et al. (2006), corroboran que la toxicidad de los hidrocarburos depende del tipo y concentración de esta sustancia química, capacidad de intercambio catiónico, pH y contenido de materia orgánica del suelo (Wang et al., 2000; Song et al., 2005; Hund-Rinke & Wiechering, 2011; Palafox et al., 2012; Whitfield et al., 2013; Kuppusamy et al., 2020), lo que puede ocasionar cambios respuestas bioquímica a nivel de las enzimas antioxidantes POD (peroxidasa), CAT (catalasa) y SOD (superóxido dismutasa) (Liu et al., 2010) y en la actividad de las células similares a natural killer (NK) que forman parte del sistema de defensa en E. fetida (Patel et al., 2007). Las concentraciones evaluadas, se determinaron considerando al xileno como el ingrediente activo. Si bien el benceno es la base estructural de los hidrocarburos aromáticos totales (HAT), el xileno causa toxicidad en suelos, debido a que es el más abundante y el más representativo en la composición de la gasolina. Pérez et al. (2015) afirman que el xileno presenta agregados y el componente “menos volátil” es el o-xileno, debido a que no hay pérdida de concentración en el tiempo, y por lo tanto es un contaminante que afecta al suelo. Desafortunadamente, la concentración exacta de los BTEX en gasolina que se liberan al medio ambiente por lo general no se conoce con exactitud (PES, 1999). Cline et al. (1991) observaron que la composición específica de la gasolina variará dependiendo del origen del petróleo, el método de producción, de la ubicación de uso final y de la estación del año. La gasolina de 90 octanos-Petroperú utiliza un crudo proveniente de caño- limón (Colombia) (Petroperú, 2013), y la gasolina de 90 octanos-Repsol es elaborada en base a un crudo africano, que son considerados altamente cargados en azufre (Repsol, 2007). Podemos indicar que sus componentes químicos podrían ser diferentes y por lo tanto, Evaluación del riesgo ambiental terrestre de dos gasolinas ecológicas de 90 octanos en la lombriz de tierra Eisenia Fetida (Savigny, 1826) 202 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | ocasionar valores de toxicidad subletal diferentes en la lombriz de tierra (Lemus et al., 2020). El xileno es el compuesto de mayor persistencia en suelo (ASTDR, 1995; Pinedo, 2014). Pero al mismo tiempo no podemos adjudicar todos los efectos tóxicos únicamente al xileno, porque los cuatro componentes del BTEX pueden ocasionar impacto por efecto de mezcla generando un efecto sinérgico o antagónico (Smith, 2010). Tas et al. (1997) durante un ensayo de 14 días determinaron que las lombrices de tierra al contacto con el xileno presente en jabones y detergentes no generaron efectos adversos en la supervivencia y comportamiento de las lombrices. La disminución de la concentración letal durante los bioensayos podría verse disminuida por la adición de agua, debido a que para mantener la humedad óptima durante los bioensayos se adicionó 75 mL de agua continuamente. Donaldson et al. (1992) indican que la volatilidad de la gasolina de suelos contaminados puede mejorar mediante la adición de agua al suelo, aunque esto va a depender de la porosidad es el suelo (Bossert & Bartha, 1984). Se ha aseverado que los compuestos aromáticos contienen grupos funcionales que son resistentes a la hidrólisis (Lyman et al., 1990; Khan et al., 2018). La capacidad de los compuestos BTEX para disolverse en agua afectará su biodisponibilidad en medio ambiente (Luo et al., 1999). Se ha indicado que la gasolina mezclada con etanol genera una menor contaminación por derrame en suelo debido a que es mucho más volátil. Sin embargo, los datos obtenidos en al presente estudio nos muestran lo contrario, aun realizando la dilución del contaminante (gasolina de 90 octanos) en alcohol etílico de 96°, se han observado parámetros sensibles en E. fetida (Repsol, 2007; AGESP, 2013). La refinería La Pampilla utiliza para la gasolina-Repsol al 7,8% de etanol en su composición, por lo tanto se podría asumir que si bien en el control de etanol los resultados fueron iguales que el control de agua durante los bioensayos, la mezcla de etanol y gasolina de 90 octanos podría ser otro factor que exacerbe los efectos subletales en la lombriz. La principal fuente de contaminación por hidrocarburos (gasolinas) en el Perú son las estaciones de servicio clandestinas las mismas que no cuentan con planes de manejo y protección (planes de contingencia), y tienen a su cargo dispensadores viejos en las islas de despacho generando derrames, filtraciones y volcaduras de combustibles. Estas distribuidoras se encuentran ubicadas en zonas periféricas de Lima (OSINERGMIN, 2015). Es necesario tener una mayor supervisión y fiscalización debido a que el ingreso del crudo altera las propiedades del suelo y afecta su equilibrio biológico (Das & Chandran, 2011; Shukry et al., 2013). Conclusiones En la presente investigación no se observó efecto tóxico letal en las dos gasolinas ecológicas de 90 octanos evaluadas sobre la lombriz de tierra E. fetida en base al xileno. Los tres parámetros subletales más sensibles a la gasolina de 90 octanos–Petroperú y – Repsol sobre la lombriz de tierra fueron la inmovilidad, el oscurecimiento, y el adelgazamiento. No se observaron efectos en la estrangulación, fraccionamiento y Susana Isabel Avalos- Ruiz - José Iannacone 203 | Campus | V. XXV | No. 30 | julio-diciembre | 2020 | | ISSN (impreso): 1812-6049 | ISSN (en línea): 2523-1820 | peso corporal. Según la ERA realizada para la gasolina ecológicas de 90 octanos- Petroperú en base al factor de seguridad y el cociente de riesgo considerando el ECA-peruano para suelos equivalente a 11 mg·kg -1 , mostró que la inmovilidad, oscurecimiento y adelgazamiento fueron los más sensibles en la lombriz de tierra. Estos tres parámetros evaluados en relación al NOEC dieron un cociente de riesgo que superó el LOC equivalente a 1. Lo mismo se presentó en la evaluación de estos tres parámetros más sensibles teniendo en consideración la CE 50 . Por otro lado, la ERA realizada para la gasolina de 90 octanos-Repsol demostró que estos tres parámetros fueron sensibles al ser evaluados en función al NOEC, al igual que la gasolina de 90 octanos-Petroperú. Finalmente, el peso húmedo a los 14 días también presentó un riesgo significativo en la lombriz al igual que la inmovilidad, oscurecimiento y adelgazamiento evaluados en base a la CE 50 . 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